第201章 35%(感谢牛津面的盟主！ )
学校的实验室条件没那么好。
空调老化，地方不大，房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧，大家却一点不觉得累，一个个热血沸腾的，就想着快点把这个项目做出来。 陈浩上次这么有动力的时候还是在大二夏天，跟老江去参加网吧举办的CS1.6网吧赛。 时过境迁。
曾经的M4网瘾少年，现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出，打入离心管底部，反复吹打。
王晓晴观察片刻后说：“测一下吧。 “
蔡卓群点点头，拔下枪头，拿着样本走到NanoDrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本，滴在检测基座上，放下检测臂，在连接的旧台式电脑上点击了测量。 屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活，转头问道：“多少？ “
蔡卓群：”浓度12ng/ul，A260/280比值是1.32，A260/230比值是0.7。 “王晓晴盯着屏幕看了一会儿，有点无奈：”这已经是第四批废样……“
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入DMS0的方法，解决了PCR扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题，接下来还会出现更多的问题……
现在的瓶颈，卡在了提取上。
miRNA在血液中的含量极低，且非常容易被血液中的RNA酶降解。
纯度不够。
A260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间，低于1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。 而A260/230比值只有0.7，更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录，杂质会让逆转录酶失活，后面的PCR扩增根本跑不出真实数据。 蔡卓群试图寻找原因：“王教授，是不是氯仿的用量不够？ 我们在取上清液的时候，可能还是带入了一些中间层的蛋白质。 “
王晓晴摇摇头：”上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十，离心时间也延长了五分钟，纯度是稍微好了一点，但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。 “
陆晓林在一旁分析：”血清里全是蛋白，游离的核酸少，Tr izol提取法，用在血清上，天生就有缺陷。 “
实验室众人，陷入沉默。
其实在后世，有专门针对血清的柱提法商业试剂盒，傻瓜式操作，半个小时就能得到高纯度的miRNA。 但在08年，专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到，就算买到了技术也还远未成熟，所以只能用最基础的化学试剂，手工一步步去抠。
蔡卓群问：“王教授，有什么办法没？ “
王晓晴：”别问我，江河呢？ 江河去哪儿了？ “
陈浩举手：”老江说有点事来着，马上回来。 “
王晓晴：”那大家先停一下吧，休息十分钟。 “
晓晴教授现在也是学聪明了。
自己苦哈哈研究半天，不如江河回来一句话直接解决。
与其浪费脑细胞，还不如休息休息，保存体力……
众人出去休息时。
易向晚和顾亦舟去给大家买水。
在路上，易向晚罕见地没有开玩笑，略显忧愁的说道：
“师兄，你说咱们这项目，到底能成吗？”
顾亦舟看了他一眼：“怎么了？ 不想干了？ “
”哎呀，那肯定不是啊，只是…… 我在想一件事嗷，退一万步讲，就算我们今天把提取纯度的问题解决了，就算接下来的逆转录、PCR体系全部都解决了，然后呢？ “
顾亦舟皱着眉头。
易向晚接着说：“我们该如何验证呢？ 既然是胰腺癌早筛，那到了最后，验证模型是否有效的话，我们需要真正的患者样本吧？ “
”而且，我们需要的是【看起来完全健康，但实际上刚患上极早期胰腺癌的患者的血】。” 其实这个问题，几个核心组员心里都有想过。
只是大家都在闷头干活，谁也没有捅破。
因为胰腺癌的隐蔽性极强。
当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时，往往已经是中晚期了。
极早期胰腺癌，患者自身没有任何症状，常规体检也查不出来。
所以，想要拿到这种样本，唯一的途径就是依靠完善的血清生物样本库。
就是医院长期保存大量体检人群的血清，几年后，当其中某些人被确诊为胰腺癌时，研究人员再把他们几年前还是健康状态时的血清找出来，用来测试江河的早筛模型，看看能不能在几年前的血液里发现异常的miRNA升高。
但现实是，08年的中国，没有医院拥有如此完善的高质量血清生物样本库。
协和也没有。
“所以，如果找不到验证数据，验证数据就没意.……”
“喝什么？” 顾亦舟打断了他。
“嗬？ 哦，呃，可乐吧，可乐就好。 “
易向晚接过冰可乐，在自己的脖子上滚了一圈，好凉。
而后他说道：“师兄，我说这个不是打击老大的意思，我的意思是……”
“行了，别解释了，想那么多干嘛？ 这些问题是老大需要考虑的，我们现在的任务是把提取这关过了，别到了最后，老大从欧洲、从挪威、从美国把样本找来了，结果咱们连RNA都提不出来，那才叫丢人。 “”靠，也是啊！ 确实有点想太多.……“
两个人带着水回到实验室。
发现江河已经回来了，正站在NanoDrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地汇报情况：
“纯度提不上去，Trizol的局限性，血清里的蛋白含量远超组织，吸取上清液的时候，不可避免地会带入杂质，如果要避免带入杂质，就只能吸取最表层的少量液体， 但那样RNA的浓度又达不到下游PCR的要求，咋办？ ”
江河淡然道：“不早跟你们说过了？ 加糖原。 “
实验室里的人都愣了一下。
老组员虽然听过江河讲这个事情，但是大家都不知道具体该怎么执行啊.……
“噢，怪我，讲的不够细。”
江河随后解释道：“在加入异丙醇沉淀之前，往水相里加入5微升浓度为5mg/ml的糖原作为共沉淀剂，不仅能作为载体帮助极微量的RNA聚集沉淀，还能让最后形成的沉淀团块变得肉眼可见，方便后续洗涤，减少丢失。 “
陆晓林思考了一下，提出了疑问：”可是这解决不了杂质的问题啊，只要我们用移液枪吸水相，还是会吸到蛋白。 “
江河回答：”所以，洗两遍，双重氯仿抽提，第一次加氯仿离心后，吸取上清液，移入新的离心管，然后，往吸出的这部分上清液里，再加一次等体积的氯仿，剧烈震荡，进行第二次离心，简单来说，牺牲第一次的取液量来换取纯度，然后再通过加入糖原共沉淀，把浓度拉回来。 “
这下大家听懂了。
王晓晴在心里给自己点了个赞。
放弃思考，果然是正确的。
一听江河的就完事了！
啧，要是每个项目都能有一个江河就好了，就不用天天在实验室熬掉头发。
晓晴教授马上就要步杨煦的后尘了。
杨煦也是，自从跟江河合作上了手术台之后，就很想每次上手术台都把江河带上了……
教授们需要严肃反思这种过于依赖江河的行为。
实验在新方案下，再次开始。
高速冷冻离心机，盖上盖子，设定参数：4摄氏度，12000g，15分钟。
离心机运转的时候很吵。
江河随便找了个凳子坐下，继续往后推演接下来的研究。
刚才他离席出去打了个电话，聊的就是血清的事情。
“放心吧，江河，我会走欧洲高规格的联合医学科研通道，通过跨国干冰冷链把极早期患者的血清特批空运过来.……”
说出这话的顾老师，真是令人安心啊。
实验室里其他人都有些紧张，大家都在等待这15分钟后的结果。
易向晚看着江河的背影，浓浓的安全感瞬间涌上来了。
仿佛只要他在，所有的问题就只是简单的步骤调整……
想必血清的问题，老大也一定能搞定的。
确实是自己多虑了啊。
但易向晚不知道的是。
江河此刻的平静，到底是经历了什么才换回来的。
那时的医疗技术比08年先进得多。
但对于江河来说，却是一个毫无意义的时代。
她走得很快，胰腺癌晚期，从发现到离世，痛苦而短促。
妻子去世后的那三年，他几乎住在了实验室里。
疯了一样地查阅文献，去研究胰腺癌的早期标志物。
总是在想，如果能早一点发现，她是不是就不会死？
近乎病态的偏执，支撑着他最后一口气。
当时江河也面对了这个提取纯度的问题。
那时的试剂盒虽然好用，但成本极高。
而且对于极其微量的标志物提取依然不够稳定。
为了找到一套稳妥且成本可控的提取体系，他独自摸索。
加多少浓度的糖原？ 离心机的温度差一摄氏度会怎样？ 转速提高500g会带来多少剪切力的破坏？ 前世的他，没有人指导。
在一次次的数据报错中，在一管管作废的样本中，在一整夜一整夜的失眠中，凝聚出了这套完美的方案一万次失败，才换来一次稳定的读数。
那时的实验室比现在宽敞，设备比现在先进，但那是他这辈子待过最冷的地方。
所以现在。
秋日正好。
只要需要把曾经刻在骨子里的正确答案拿出来，就像在数学题上，毫不犹豫地写下那个唯一解。 “滴”
离心机停止转动。
蔡卓群立刻上前，小心翼翼，取出离心管。
管底，出现了一个白色沉淀。
加入糖原后，成功析出RNA复合体。
加入无酶水溶解。
移液枪吸取1微升。
滴入NanoDrop基座。
测量！
新的数据出现。
浓度：14ng/ul。
A260/280：1.92。
A260/230：2.01。
极其完美的数据！
虽然浓度只有十几，但这已经是普通提取法的数倍，最关键的是，它的纯度极高，足够支撑下游的逆转录PCR。
王晓晴久久没有说话。
她知道在现有的条件下，手工把血清RNA提取做到这种纯度和浓度，意味着什么。
这意味着极致的原理掌控和参数理解。
这意味着，江河随口说出的几个步骤改动，直接跨越了当前业内好几年的摸索时间。
她转过头，看向江河。
在这个二十一岁的学生身上，
她甚至看到了一种令人敬畏的科研压迫感。
作为一个无神论者，江河身上有仙家的传说，现在是不得不信了.……
陈浩最淡定。
他被江河装过最多的逼，自适应拉满。
于是淡定道：“老江，纯度过关了。 “
江河点头，在实验记录本上边写边说：”提取这一步的标准作业程序就按这个定下来，接下来的所有血清样本，全部按照双重氯仿加糖原的流程提。 “
江河不忘夸了一句：
”进度我很满意，各位，辛苦了，继续吧，我得去一趟医院，接下来的工作交给你们。”
众人齐声应道：“收到！ “
江河洗完手，双手揣兜，离开实验室，帅得没话说。
在他脑海里，其实有一个非常明确的进度条。
【miRNA胰腺癌早筛项目进度：……】
提取流程攻克，再涨十个百分点。
【miRNA胰腺癌早筛项目进度：5……】